Đoạn klenow là gì
Unit activity was measured using a twofold serial dilution method. Dilutions of enzyme were made in a 50% glycerol Klenow (3ʹ→5ʹ exo–) storage solution and added to 50 µl reactions containing calf thymus DNA, 1x Klenow Reaction Buffer, 3H-dTTP and 100 µM dNTPs. Reactions were incubated 10 minutes at 37°C, placed on ice, and analyzed using the method of Sambrook and Russel (Molecular Cloning, v3, 2001, pp. A8.25- A8.26) Protein concentration is determined by OD280 absorbance. Physical purity is evaluated by SDS-PAGE of concentrated and diluted enzyme solutions followed by silver-stain detection. Purity is assessed by comparing the aggregate mass of contaminant bands in the concentrated sample to the mass of the band corresponding to the protein of interest in the diluted sample. Single-stranded exonuclease is determined in a 50 µl reaction containing a radiolabeled single-stranded DNA substrate and 10 µl of enzyme solution incubated for 4 hours at 37°C. Double-stranded exonuclease activity is determined in a 50 µl reaction containing a radiolabeled double-stranded DNA substrate and 10 µl of enzyme solution incubated for 4 hours at 37°C. Double-stranded endonuclease activity is determined in a 50 µl reaction containing 0.5 µg of plasmid DNA and 10 µl of enzyme solution incubated for 4 hours at 37°C. E. coli contamination is evaluated using 5 µl replicate samples of enzyme solution that are denatured and screened in a TaqMan qPCR assay for the presence of contaminating E. coli genomic DNA using oligonucleotide primers corresponding to the 16S rRNA locus. Chương 1 , n ở đây không thể nhận biết được. Ví dụ: SalI cắt trình tự (G¯TCGAC) và XhoI cắt trình tự (C¯TCGAG), các trình tự EcoRII, enzyme BstNI có thể
nhận biết chính xác cùng một trình tự như EcoRII (mặc dù nó cắt DNA ở vị EcoRI : 10×(H) 1. DNA polymerase (DNA-dependent DNA polymerase) - Ứng dụng chính chương 3). Taq pol thay thế cho DNA polymerase I của E. coli do có khả năng chịu nhiệt cao phù hợp với cần mồi. Enzyme ligase thường dùng là của phage T4 xâm nhiễm trong E. coli. Chức năng của enzyme này là + Phosphoryl hóa các đoạn nối (linker) và các đoạn DNA không có nhóm 5’ phosphate để chuẩn bị đầu
bằng hoặc đầu lồi nhưng chỉ nhô ra một hoặc hai nucleotide. + Tạo ra các đột biến khuyết đoạn (deletion)
tại các trình tự tận cùng của DNA sợi đôi mạch thẳng. định trình tự DNA. |